Covalent labeling strategy of the native P2X7 receptor for super-resolution microscopy
Stratégie de marquage covalent du récepteur P2X7 natif pour microscopie super- résolutive
Résumé
P2X7, a ligand-gated ion channel activated by extracellular ATP, is a major feature of purinergic signaling. Its functions is yet to be elucidated, notably in the central nervous system homeostasis balance. Its neuropathological implications are numerous and highly related to inflammation and its propagation. We are currently lacking selective tools to decipher the fine neuropathological dynamic on this protein. The current work here presents the development and application of an innovative chemical approach base on affinity to covalently decorate this receptor with a biotin. The final reagent, called LNASAB, allows us to perform super-resolution in microglia in different pro-inflammatory conditions and explore the dynamics of nanodomain form by P2X7.
Le récepteur ionotrope activé par l’ATP extracellulaire P2X7 est un acteur central de la signalisation purinergique. Il exerce un rôle encore mal compris, notamment dans le maintien de l’homéostasie du système nerveux central. Ses implications neuropathologiques sont nombreuses et liées à l’inflammation à et la propagation de cette dernière. Aucun outil d’étude robuste n’a montré une sélectivité suffisante pour étudier la fine dynamique pathophysiologique de cette protéine. Ces travaux de thèses proposent le développement et l’application d’une approche de marquage covalent d’affinité afin de greffer une molécule d’intérêt sur le récepteur endogène. Le réactif de marquage issu de ces travaux, appelé LNASAB, nous a permis d’explorer l’organisation nanométrique du récepteur P2X7 microgliale par microscopie super-résolutive, ainsi que la dynamique des nanodomaines qu’il compose en conditions pro-inflammatoires
Origine : Version validée par le jury (STAR)