Etude par DDI-microsystème de galactoclusters interagissant avec PA-IL de Pseudomonas aeruginosa : Influence de l’aglycone aromatique.
Résumé
Etude par DDI-microsystème de galactoclusters interagissant avec PA-IL de Pseudomonas aeruginosa : Influence de l’aglycone aromatique. Lucie Dupin1, Francesca Casoni2, Gérard Vergoten3, Alice Goudot1, Caroline Ligeour2 Albert Meyer2, Thomas Gehin1, Emmanuelle Laurenceau1, Eliane Souteyrand1, Olivier Vidal3, Jean-Jacques Vasseur2, François Morvan2, Yann Chevolot1 1 UMR5270, Université de Lyon, INL/ECL, 36 avenue Guy de Collongue, 69134 Ecully Cedex 2 UMR 5247, CNRS/Université Montpellier1/2, Institut des Biomolécules Max Mousseron, Université de Montpellier 2, Place E. Bataillon 34095 Montpellier Cedex 5, France 3 UMR 8576, Unité de Glycobiologie Structurelle et Fonctionnelle (UGSF), Université de Lille 1 - Cité Scientifique, Avenue Mendeleiev, Bat C9, 59655 Villeneuve d'Ascq cedex Pseudomonas aeruginosa est une bactérie opportuniste impliquée dans 10 à 30% des maladies nosocomiales par le fait qu’elle a développé des résistances aux antibiothérapies conventionnelles. De nouvelles approches thérapeutiques sont basées sur l’inhibition de facteurs de virulence notamment certaines lectines. Les lectines sont des protéines qui reconnaissent spécifiquement des motifs saccharidiques. Les glycoclusters sont des molécules de synthèse multivalentes (portant plusieurs motifs saccharidiques) capables d’inhiber l’action de ces lectines bactériennes. Pour étudier les interactions lectines-glycoclusters, nous avons conçu un microsystème d'analyse basé sur une technologie biopuce. Les glycoclusters portant une étiquette ADN sont immobilisés par hybridation spécifique avec le brin complémentaire d'une puce à ADN (DNA Directed Immobilization, DDI). Cette technologie permet de réaliser une étude multiplexée et une analyse à haut débit de ces interactions tout en utilisant une très faible quantité d’échantillon (quelques pmoles)1. Cet outil permet également d'évaluer l'affinité de chaque glycocluster pour une lectine donnée par une mesure de fluorescence, d’IC50 et de Kd2. Le DDI-glycocluster array permet donc un criblage de glycoclusters capables d’interagir avec des lectines de Pseudomonas aeruginosa qui seraient impliquées dans la formation du biofilm, dans le but de trouver de nouveaux agents anti-infectieux. Nous avons principalement étudié PA-IL qui reconnait spécifiquement le D-Galactose. Le criblage d’une banque de 150 galactoclusters a montré que ceux possédants un cœur centré mannose portant des bras longs et flexibles ainsi qu’un aglycone phényle étaient affins pour PA-IL3. Par la suite, l’influence d'autres aglycones aromatiques sur l’interaction avec PA-IL a été étudié par des mesures d’IC50 et de Kd. De cette étude est ressortit, que les galactoclusters possédant un aglycone type naphtyle et biphényle augmentaient significativement l’interaction avec PA-IL. Enfin, des études de docking menées en parallèle ont aboutit aux mêmes conclusions. (1) Chevolot, Y.; Bouillon, C.; Vidal, S.; Morvan, F.; Meyer, A.; Cloarec, J. P.; Jochum, A.; Praly, J. P.; Vasseur, J. J.; Souteyrand, E. Angew. Chemie. Int. Ed. English 2007, 46, 2398–2402. (2) Goudot, A.; Pourceau, G.; Meyer, A.; Gehin, T.; Vidal, S.; Vasseur, J. J.; Morvan, F.; Souteyrand, E.; Chevolot, Y. Biosens. Bioelectron. 2013, 40, 153–160. (3) Gerland, B.; Goudot, A.; Ligeour, C.; Pourceau, G.; Meyer, A.; Vidal, S.; Gehin, T.; Vidal, O.; Souteyrand, E.; Vasseur, J.-J.; Chevolot, Y.; Morvan, F. Bioconjug. Chem. 2014, 25, 379–92.