Analyse structurale de la nouvelle N7 guanine-MTase du virus de la Brème bordelière
Résumé
Récemment l'ordre des Nidovirales a été reclassé en 9 familles (1) en fonction de leur organisation génomique et de la conservation des enzymes réplicative. Cet ordre est composé de virus à génome d'ARN (+) simple brin, de complexité et de taille variable, allant de 12,7kb pour les Arteriviridae à 41,1kb pour les Mononiviridae qui sont parmi les plus grands virus à ARN (+) connus (2). On présume que la plupart des Nidovirales ont adoptés un système de coiffe en 5' de leurs génome d'ARN. Cette coiffe permet à la fois la protection de l'ARN contre la dégradation par les exonucléases 5' de l'hôte, mais aussi permet son recrutement par le ribosome pour la traduction. L'acquisition de la coiffe s'effectue en 4 étapes successives nécessitant 4 enzymes : RTPase, GTPase, N7-MTase, 2-O-MTase. Une étude récente (3) de recherche bio-informatique d'analyse de séquences a permis de mettre en évidence la présence de 2'-O-MTase dans la quasi-totalité de l'ordre des Nidovirales. De plus, cette recherche a mis en évidence 6 motifs conservés chez les N7-MTase. L'analyse des séquences dans le sous-ordre des Tobaniviridae a permis la découverte de 10 séquences de N7-MTase putative. Ces nouvelles signatures ont la particularité d'avoir été identifié dans l'Orf1a alors que jusqu'ici ces enzymes ne se trouvait que dans l'Orf1ab. Poursuivant ce travail, nous avons réalisé différentes construction à partir du génome du Virus de la Brème bordelière (VBB) afin d'exprimer des protéines de différentes longueurs, contenant les 6 motifs caractéristiques des N7-MTase. L'activité N7-MTase de ces protéines a été caractérisées jusqu'à obtenir la protéine optimale active. Ce candidat est en cours de caractérisation structurale, notamment par la recherche de conditions adéquats de cristallogenèse et de test de diffractions des cristaux.
Origine : Fichiers produits par l'(les) auteur(s)