Cryopreservation of European catfish (Silurus glanis L.) spermatozoa
Cryoconservation du sperme de silure (Silurus glanis L.)
Résumé
Semen of European catfish stripped into an immobilizing solution (200 mM NaCl, 30 mM Tris, pH7) was successfully cryoperserved after a stepwise freezing and fast-thawing procedure. Drops of sperm were diluted in an immobilizing solution containing 12 or 15 % of glycerol, held on aluminium discs and exposed for 10 min to liquid nitrogen vapour (-80 to -85° C) before transfer into liquid nitrogen. Pellets were thawed for 20 s in test tubes (temperature 36°C). The survival of spermatozoa after thawing was evaluated from the total motility, the percentage of motile cells and the percentage of fertilization. Batches of 40-80 eggs in tripicate from several females were fertilized with cryoperserved/thawed spematozoa activated with distilled water, this resulted in an average of 45.2 % (range 4-48 %) of hatched eggs compared to 70.6 % (range 7-71 %) with the intact sperm, using comparable numbers of spermatozoa/egg in both groups. In one expermiment the percentage of hatched eggs was similar after fertilization with frozen in intact sperm. There was a relatively hygher number of abnormal embryos in the frozen sperm group (52.5 %, s.d. = 11.4 %) in comparison with the control (31.5 %, s.d. = 3.3 %). However, this difference was not statistically significant. The motility of frozen sperm was slightly lower than that of the controls.
Du sperme de poisson chat européen, recueilli dans une solution d'immobilisation (200 mM Na Cl, 30 mM Tris, pH7) a été conservé par cryoconservation après une procédure séquentielle de refroidissement et de réchaufferment rapide. Des gouttes de sperme ont été diluées dans une solution d'immobilisation contenant 12 ou 15 % de glycerol, placées dans des disques d'aluminium et plongées pendant 10 mn dans des vapeurs d'azote liquide (-80 à -85°C), avant d'être transférées dans de l'azote liquide. De petites quantités ont été réchauffées pendant 20 sec. dans des tubes à essais (température 36°C). La survie des spermatozoïdes après réchauffement a été évaluée à partir de la motilité totale, du % des cellules motiles et du % de fertilisation. Des lots de 40 à 80 oeufs, avec triplicats, provenant de plusieurs femelles ont été fertilisés avec des spermatozoïdes cryoconservés et réchauffés, après activation par de l'eau distillée ; une moyenne de 45,2 % d'éclosion (de 4 à 48 %) a été obtenue par cette méthode, contre 70,6 % (7 à 71 %) avec du sperme natif, en utilisant des nombres comparables de spermatozoïdes et d'oeufs dans chacun des groupes. Dans une expérimentation, le % d'éclosion a été identique, que cela soit avec du sperme cryoconservé ou natif. Un nombre relativement plus élevé d'embryons malformés a été observé dans le groupe obtenu avec du sperme cryoconservé (52,5 % s.d.= 11,4 %) par comparaison au témoin (31,5 % s.d. = 3,3 %). Toutefois cette différence n'était pas statistiquement significative. La mobilité du sperme congelé était légèrement plus basse que celle des témoins.