Détection de Pseudomonas phaseolicola (Burkh.) Dowson par la technique ELISA
Résumé
La technique ELISA a été appliquée à la détection de Pseudomonas phaseolicola dans des graines et des feuilles contaminées de haricot. Le test ELISA a été réalisé selon la méthode sandwich d'après CLARK & ADAMS (1977), modifiée par l'emploi de tampon substrat : Tris-HCI, NaCI avec la phosphatase alcaline d'Escherichia coli. Les immunoglobulines ont été purifiées par chromatographie d'affinité avec soit la protéine A, soit la bactérie entière Ps. phaseolicola comme ligand (fig. 1). Des études préalables ont montré que la technique ELISA donnait des résultats positifs avec les suspensions bactériennes et les filtrats correspondants après passage sur membrane de 0,22 μm. Dans nos conditions expérimentales, il ressort que : - la limite de sensibilité de cette technique correspond à une suspension bactérienne de 104 bactéries/ml en 4 h de réaction (tabl. 1). - Les métabolites bactériens contenus dans les filtrats donnent des réactions parallèles à celles obtenues avec les suspensions (tabl. 2 et 3). - La concentration de métabolites solubles détectés est d'environ 10 ng par ml par référence à la sérum albumine. - La sensibilité de la technique ELISA ne peut être exprimée en terme de concentration bactérienne mais plutôt en terme de concentration d'antigènes bactériens, solubles ou non. Il serait d'un g