Le facteur EEF-1B et la régulation de l'élongation de la synthèse protéique dans l'embryon d'oursin Sphaerechinus granularis

Résumé : La synthèse protéique est composée de trois phases : l'initiation, l'élongation et la terminaison. Le facteur d'élongation eEF-1 contient deux éléments : une protéine G, eEF-1A et un complexe macromoléculaire d'échange de GDP/GTP, eEF-1B. Chez les animaux supérieurs, eEF-1B est constitué de quatre sous-unités eEF-1βγδ et la Vanyl-ARNt synthétase (Val-RS). Nous avons cloné et séquencé deux ADNc de 2 et 2,7kb codant pour eEF-1δ chez l'oursin Sphaerechinus granularis. Ils diffèrent uniquement par la longueur de leur région 3'UTR. Leur expression est régulée et découplée de celle de eEF-1A au cours du développement précoce. L'analyse phylogénétique montre que eEF-1δ provient de la fusion d'un domaine C-terminal du gène ancestral β avec un domaine Leucine Zipper. A partir d'une protéine recombinante issue de l'ADNc codant pour eEF-1δ, nous avons obtenu un anticorps spécifique. Il nous a permis de montrer que la protéine eEF-1δ existe, dans l'ovule de l'oursin, sous deux isoformes présentes dans un complexe de haut poids moléculaire et que eEF-1δ est fortement associée à eEF-1γ. Des protéines présentant des homologies avec une protéine chaperon et une protéine ribosomale restent associées à eEF-1δ au cours de la purification. L'utilisation de polyamines à des concentrations physiologiques a montré un effet inhibiteur de la phase d'élongation dans un lysat acellulaire d'oursin. Un messager synthétique, sans initiation spécifique, a été traduit dans des lysats de réticulocytes de lapin pour comprendre le rôle de l'association de la Val-RS au complexe. Selon le site de fixation du ribosome, il conduit à un peptide polyValine ou polySérine. La traduction du polyValine est toujours supérieure à celle du polySérine. La phosphorylation avec CDK1/cycline B diminue l'élongation du polyValine et augmente cele du polySérine, suggérant une régulation de CDK1 sur l'élongation par phosphorylation des sous-unités de eEF-1B.
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Thèse
Biologie cellulaire. Rennes 1, 2000. Français
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Annabelle Monnier. Le facteur EEF-1B et la régulation de l'élongation de la synthèse protéique dans l'embryon d'oursin Sphaerechinus granularis. Biologie cellulaire. Rennes 1, 2000. Français. 〈tel-01117677〉

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