Analyse d’un échantillon en 3 dimensions par une technique de Serial Block Face Imaging amovible

Marine Malloci (1) , Stéphanie Blandin (1) , Paul Dorval , Philippe Hulin (1) , Pierre-Alix Dancer , Perrine Paul-Gilloteaux (1)

1 SFR François Bonamy - Structure fédérative de recherche François Bonamy

L’analyse tridimensionnelle d’un échantillon trouve ses champs d’application dans l’étude de la micro anatomie et la biologie du développement Elle peut être réalisée à partir d’échantillons histologiques Le principe méthodique est de générer une grande quantité d’images directement à partir de la surface du bloc dans lequel est inclus l’échantillon, et ce, au fur et à mesure qu’il soit sectionné mécaniquement (technique de Serial Block Face Imaging) Les images sériées sont alors déjà alignées et permettent de reconstruire en trois dimensions l’échantillon, afin de l’explorer selon n’importe quel plan de coupe virtuel Actuellement, il existe sur le marché différents systèmes intégrés de microscopie épiscopique haute résolution ( mais les appareils et leurs consommables sont onéreux, la préparation des échantillons est fastidieuse et toxique (fixation en méthanol, inclusion en résine colorée JB 4 Polyscience Par rapport aux systèmes d'HREM commerciaux, cette technique demande une préparation plus simple et moins onéreuse des échantillons. De plus, ce système est modulable, peu encombrant et adaptable aussi bien pour des échantillons inclus en paraffine qu'en congelé. Cette technique nous a permis de faire une reconstruction simplifiée qui conserve les structures de l'échantillon. Les structures demeurent mieux conservées en paraffine qu'en congelé. En congelé, nous avons montré la possibilité de travailler avec des marquages fluorescents type GFP.  En perspectives, nous travaillons à automatiser ce système (prise d'images et coupe). Il sera également nécessaire de tester d'autres échantillons (cerveau, oeil…). En ajoutant une deuxième source laser en excitation (647 nm), cela nous permettrait de visualiser des marquages dans le rouge lointain pour les échantillons congelés, afin de les distinguer de l'autofluorescence du tissus. Enfin, nous travaillons à un système pour récupérer les coupes et faire des colorations et immunomarquages sur les zones d'intérêts.

Domaines: Imagerie

Marine Malloci, Stéphanie Blandin, Paul Dorval, Philippe Hulin, Pierre-Alix Dancer, et al.. Analyse d’un échantillon en 3 dimensions par une technique de Serial Block Face Imaging amovible. AFH 2019, Jun 2019, Strasbourg, France. ⟨hal-02267585⟩