Continuous high-throughput colorimetric Assays for alpha-transaminases.

Dosages colorimétriques continus à haut débit pour les alpha-transaminases.

Egon Heuson (1) , Jean-Louis Petit (2) , Franck Charmantray (1) , Véronique de Berardinis (2) , Thierry Gefflaut (1)

1 ICCF - Institut de Chimie de Clermont-Ferrand
2 LGBM - Laboratoire de Génomique et Biochimie du Métabolisme

Transaminases are efficient tools for the stereoselective conversion of prochiral ketones into valuable chiral amines. Notably, the diversity of naturally occurring α-transaminases offers access to a wide range of l- and d-α-amino acids. We describe here two continuous colorimetric assays for the quantification of transamination activities between a keto acid and a standard donor substrate (l- or d-Glutamic acid or cysteine sulfinic acid). These assays are helpful for kinetic studies as well as for high-throughput screening of enzyme collections.

Les transaminases sont des outils efficaces pour la conversion stéréosélective de cétones prochirales en amines chirales de haute valeur ajoutée. Notamment, la diversité des α-transaminases naturelles offre un accès à une large gamme de l- et d-α-aminoacides. Nous décrivons ici deux tests colorimétriques continus pour la quantification des activités de transamination entre un acide cétonique et un substrat donneur standard (acide l- ou d-glutamique ou acide cystéine sulfinique). Ces tests sont utiles pour les études cinétiques ainsi que pour le criblage à haut débit de collections d'enzymes.

Mots clés: Transaminase; Amino acids; Screening assay; Cysteine sulfinic acid; High-throughput screening

Domaines: Chimie

Egon Heuson, Jean-Louis Petit, Franck Charmantray, Véronique de Berardinis, Thierry Gefflaut. Continuous high-throughput colorimetric Assays for alpha-transaminases.. Uwe T. Bornscheuer; Matthias Höhne. Methods in Molecular Biology, 1685, Humana Press, pp.233-245, 2017, Protein Engineering. ⟨hal-01789998⟩