Co-Assemblage de la β-lactoglobuline et de la lactoferrine en microsphères
Résumé
Par leur importaβnce capitale, les processus d’assemblage des protéines sont très étudiés dans de nombreux
domaines scientifiques . Ces processus permettent la conception de diverses suprastructures représentent
une réelle opportunité d’innovation .
L’encapsulation de molécules bioactives , l’ immobilisation d’enzymes et le développement de nouveaux
matériaux sont souvent évoqués dans la littérature comme potentiel s exemples d’applications de ces suprastructures.
Dans des conditions expérimentales adaptées, les protéines globulaires de charge opposée s’assemblent en nano - ou microsphères appelés coacervats, avec séparation de phase liquide - liquide [1] .
Dans le cadre de ce travail nous nous sommes intéressés au co-assemblage en microsphères de deux protéines laitières de charge opposée : la protéine acide - β-lactoglobuline ( β-LG) et la protéine basique
lactoferrine (LF). La formation de microsphères est observée à faible force ionique et dans une étroite
fenêtre de pH comprise entre le pI des deux protéines. La concentration protéique et le rapport molaire entre les deux protéines sont deux facteurs importants pour la formation demicrosphères. Un diagramme de phase présentant les domaines de formation de microsphères en fonction de la concentration des protéines a été construit. A partir du diagramme de phase les concentrations et le rapport molaire optimaux de formation de
microsphères ont pu être identifiés. La récupération de protéines dans les microsphères dans son domaine optimal de formation varie de 55 à 72% et 75 à 82 % respectivement pour la β - LG et la LF. Un équilibre
protéique s’opère donc entre la phase concentrée ( microsphères) et la phase diluée. Les paramètres thermodynamiques de l’interaction au niveau moléculaire entre les deux protéines ont été déterminés par titration calorimétrique isothermique (ITC) . Les constantes de dissociation déterminées à différentes
températures (10, 25, 35 et 40°C) étaient de l’ordre du μM. Des études sont actuellement conduites
pour identifier les régions de chaque protéine impliquées dans l’assemblage et pour comprendre l’organisation
de ces deux protéines à l’intérieur des microsphères