Characterisation of Streptococcus thermophilus CNRZ368 oxidative stress-resistant mutants: involvement of a potential Rgg-like transcriptional regulator

Annabelle Fernandez (1) , Frédéric Borges (1) , Annabelle Thibessard (1) , Brigitte Gintz (1) , Bernard Decaris (1) , Nathalie N. Leblond-Bourget (1)

1 LGM - Laboratoire de génétique et microbiologie

Eight mutants of Streptococcus thermophilus CNRZ368 presenting a menadione-resistant phenotype were selected and the locus mutated in each mutant was identified. Among these clones, 5 were disrupted in a gene of unknown function, 2 were impaired in genes involved in cellular metabolism and the last one (the mutant 15H7) was disrupted in rgg encoding a putative transcriptional regulator. To determine if rgg could be a key regulator of the superoxide defence of S. thermophilus, the 15H7 mutant was further characterised. The results from our work indicate that the rgg gene, mutated in the 15H7 genome, is a pseudogene composed of 2 ORFs (rggA and rggB) that are potentially translated in two different frames. Moreover, transcription analysis demonstrated the existence of a transcript containing rggA, rggB and orf2. Construction of $\Delta$rggA, $\Delta$rggB and orf2 mutants and their phenotypic analysis confirmed the involvement of rggA and rggB in the oxidative stress response. The question of the role of the pseudogene rgg is still open.

Caractérisation de mutants résistants au stress oxydant chez Streptococcus thermophilus CNZR368 : implication d'un régulateur transcriptionnel putatif de type Rgg. Huit mutants de Streptococcus thermophilus CNRZ368, présentant un phénotype de résistance à la ménadione ont été sélectionnés et le locus muté a été identifié pour chacun d'eux. Parmi ces clones, 5 sont interrompus dans un gène de fonction inconnue, 2 sont mutés dans des gènes impliqués dans le métabolisme cellulaire et un autre (15H7) est interrompu dans le gène rgg codant potentiellement un régulateur transcriptionnel. Afin de déterminer si rgg est un régulateur majeur de la défense contre le stress superoxyde le mutant 15H7 a été plus amplement étudié. Les résultats de notre travail indiquent que le gène rgg, muté dans le génome de 15H7, est un pseudogène composé de deux ORF (rggA and rggB) potentiellement traduites dans deux phases de lecture différentes. De plus, l'analyse transcriptionelle démontre l'existence d'un transcrit englobant rggA, rggB et orf2. La construction des mutants $\Delta$rggA, $\Delta$rggB et orf2 ainsi que l'analyse de leur phénotype confirme l'implication de rggA et rggB dans la réponse contre le stress oxydant. La question concernant le rôle du pseudogène rgg est toujours ouverte.

Mots clés: Rgg-like transcriptional regulator; oxidative stress; Streptococcus thermophilus

Domaines: Alimentation et Nutrition; Ingénierie des aliments

Annabelle Fernandez, Frédéric Borges, Annabelle Thibessard, Brigitte Gintz, Bernard Decaris, et al.. Characterisation of Streptococcus thermophilus CNRZ368 oxidative stress-resistant mutants: involvement of a potential Rgg-like transcriptional regulator. Le Lait, 2004, 84 (1-2), pp.77-85. ⟨10.1051/lait:2003043⟩. ⟨hal-00895528⟩